实验材料：
基础培养基
血清（常规为FBS/NBS）
电动移液枪
移液管[NEST]
无冰冰盒[NEST]
T25培养瓶[NEST]
自动旋盖机[NEST]
盒装无菌吸头[NEST]
100mm细胞培养皿[NEST]
15mL、50mL无菌离心管[NEST]
不能忘记的准备：
1.记得一定要预定干冰。。〔蝗荒阆赴〕隼纯擅坏胤酱 ，要是液氮罐距离实验室远点 ，你的细胞可能就没了。
2.用来转移细胞的无冰冰盒一定要灭菌。。〉比 ，如果条件刻苦点的泡沫盒 ，也不要偷懒 ，无论什么装载容器 ，都要提前灭菌 ，可以有效规避污染风险。
3.水浴锅提前预热至37℃。
4.培养基预热至37℃。
要开始了。ㄇ煤诎澹
1.在生物样本库中搜寻到目标细胞,在液氮罐找到对应的细胞 ，放入预先准备好的无冰冰盒（容器）内。冰盒内装有碎干冰 ，冰芯的铝合金外壳协同高导热的合金？ ，确保样品能快速冷却 ，孔之间的温度差异小于0.1℃ ，能很好的维持样品间的温度一致性。
2.在细胞进入水浴锅解冻前 ，务必将冻存管竖直立在桌面上10~20s ，这样之后 ，可能排空存在在冻存管盖缝隙内的液氮。尤其是外旋盖的冻存管 ，特别要注意！不然在水浴解冻的时候有概率会砰的一声爆发出来！极为危险。
3.将冻存管在37℃水浴锅内水浴解冻 ，因为DMSO在常温情况下对细胞有毒副作用 ，若解冻时间过长 ，会导致细胞损伤并影响其存活率 ，所以一定要快 ，解冻过程在1~2min内完成。
4.解冻完成后 ，在生物安全柜内 ，用自动旋盖机打开冻存管 ，之后在移液枪将冻存管内细胞复悬 ，然后将细胞悬液转移至含有5~10ml培养基的离心管中 ，1000rmp离心5min（根据各自细胞的特新调整离心力和离心时间）。如果没有培养基稀释 ，在离心过程中较高浓度的DMSO会对细胞损伤 ，影响活存活率！
5.丢弃上清 ，里面还有DMSO和死去细胞的裂解产物 ，这不是我们所需要的。将剩余的细胞用培养基稀释复悬 ，稀释比例为1:10~1:15 ，再按照大家各自实验需求 ，分装到100mm培养皿或者T25瓶中 ，显微镜观察细胞状态 ，然后转移至细胞培养箱中培养。
复苏后的注意点：
复苏后记得每天都要观察细胞状态 ，及时更换培养基 ，确保细胞所需营养的充足和生长环境的清洁。
使用到的NEST产品：
移液管[NEST]
无冰冰盒[NEST]
T25培养瓶[NEST]
自动旋盖机[NEST]
盒装无菌吸头[NEST]
100mm细胞培养皿[NEST]
15mL、50mL无菌离心管[NEST]
